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原生動物液氮超低溫保存研究

時間:2020-06-12 10:04來源:未知 作者:班德液氮罐 點擊:
原生動物的種類與數量很多,分布極廣,生活周期短,與人類關系極其密切。反芻動物瘤胃纖毛蟲類原生動物占瘤胃微生物總量的50%以上并與許多瘤胃功能有關,如纖維素、淀粉、蛋白質的消化。它們還可以降解植物和霉菌毒素,維持瘤胃內環境穩定,清除消化道中某些病原菌,增強動物免疫力從而提高肉食品的安全性[2¨。液氮罐

瘤胃纖毛蟲原生動物在體外很難培養,采用傳統傳代保種方法不僅浪費人力物力而且菌種容易喪失活性甚至死亡,實驗結果的重復性差[2引。超低溫保存為對纖毛蟲進行體內外消化、基因組和生物

技術研究提供了方便并且可以長期保持細胞活性。

早期,研究人員采用一步慢速冷凍法保存纖毛蟲成活率只有5%左右;后來人們對冷凍方法進行改進,形成兩步冷凍法。**步慢速冷凍至保溫溫度,使胞外水結冰;第二步保持恒溫使細胞充分脫水,然后將樣品直接投入到液氮中保存[2¨。

細胞的超低溫保存活性與冷凍液、保護劑的種類和濃度、保護劑與細胞混合時的平衡溫度和時間、冷卻速度和解凍液等多個因素有關。使用甘油或二甲基亞砜作為保護劑,以25℃替代5℃作為平衡溫度,纖毛蟲解凍后的活性增強[23J。Nsabimana[2們研究發現不同種類纖毛蟲的**冷卻速度不同,J.prosto—ma,D.rurninantium,E.caudaturn,E.cauda—turn caudatum,P.multivesiculatum和E.maggii的**冷卻速度分別是1.5,1.7,1.5,1.2,1.6,2.3℃/min。其它條件不變,以瘤胃液作為凍融液可顯著提高纖毛蟲凍融存活率。液氮罐

遺憾的是,至今還未見關于使用其它超低溫保存方法保存原生動物的報道。在超低溫保存研究中,簡單快速的檢測細胞活性的方法也是非常必要的。

通過顯微鏡觀察菌運動性確定菌活性是原生動物研究中常用的方法,但這種方法存在兩個不足:一是把不運動的活細胞誤認為是死細胞而導致結果不準確,二是外部環境影響細胞運動,為觀察帶來不便。雙重熒光染色法的變異系數低,其結果的準確性更高,可作為一個快速測定原蟲細胞損傷程度的工具[2捫。
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