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關于液氮罐冷凍細胞的那些事

時間:2018-02-24 09:44來源:班德液氮罐 作者:班德液氮罐 點擊:
關于液氮罐冷凍細胞的那些事
實驗室里,細胞的長期使用也需要長期冷凍保存,以便于長期保存,需要的時候取出來。使細胞復蘇,就是讓冬眠的細胞復蘇起來?;貜推渖盍?br />
  其實,細胞凍存技術和復蘇技術已經不是什么高科技,不過這里面還有很多小的注意事項和流程方面需要的細節的。

  一、冷凍越慢越好,復蘇越快越好

  高大上的實驗室可以使用程序冷凍儀,一切由機器代勞,普通實驗室就需要人工實現預凍的過程了,不過,細胞冷凍越慢越好,寧慢勿快。做細胞冷凍前,事先留出充足的時間。

  而復蘇速度越快越好:從液氮罐里取出來之后,迅速放在37°C水浴中,然后使勁搖呀搖,令其盡快融化。

  二、高高興興上班,平平安安回家

  細胞凍存和復蘇是細胞培養技術里面最容易出事的部分,凡是和液氮罐接觸的操作,注意戴保護眼鏡和手套。最需要小心的是:復蘇的時候,在水浴中搖呀搖的時候,有時候小瓶會爆炸的。所以,一定要戴保護眼鏡和手套。

  細胞凍存液中的DMSO是有毒致癌的,接觸的時候一定一定要帶好手套。

  三、凍存細胞數量要足夠

  無論再怎么小心,細胞在冷凍和復蘇過程中總會死掉一批的。所以,一開始凍存細胞的數量要足夠。一般最低要達到5×106/毫升,一瓶不夠兩瓶湊。但是,這個不能一概而論。有些細胞,比如:雜交瘤細胞,只需要1-3x106/毫升。

  四、做好標記

  把培養瓶放入提手,末端應該扎有小牌,注明主人的名字,細胞名稱和凍存日期。還要在每個凍存管上寫上細胞名稱,代數和凍存日期。

  實驗室的液氮罐都是公用的,每個人應該有屬于自己的提手。毛博當年就發生過為了找自己的細胞,被迫把整個液氮罐翻了個底朝天的慘劇。

  五、細心呵護

  剛剛復蘇的細胞就象剛剛出生的baby,非常脆弱,需要我們的細心呵護。培養液要事先在培養箱或者水浴中復溫,一切的和細胞接觸的動作都要輕柔。

  把細胞從凍存管里吸出來,注入離心管,要輕輕地吸取和滴加。包括給離心管補加培養液的時候,都要輕輕地滴加。離心要用低速離心(500-1000轉/分鐘),吹打要用專用的吹打管,而不要圖方便用移液槍,吹打也要輕輕的。

  六、DMSO的問題

  上面提到了DMSO是一種有毒致癌物質。那么,解凍之后,應不應該去除凍存液中的DMSO呢?答案是no。除了極少數特別注明的對DMSO敏感的細胞外,99%的細胞都不需要去除DMSO,解凍后的頻繁換液會慢慢去除掉DMSO的。

  七、物離鄉貴,人離鄉賤

  解凍后的細胞要用和以前一樣的培養液和血清。因為每一種細胞都有自己特定的,并且已經熟悉了的生長環境。突然使用不一樣的培養液和血清,會造成細胞生長不良,甚至死亡。這和一個人突然離家千里,會水土不服是一樣的道理。

  細胞培養離不開人。毛博還記得當年當實驗狗的時候,放個長假都要惦記著培養箱里面的細胞是不是該換液了。而掌握了有效的凍存和復蘇的技術,就可以解決這個問題。春節回家前把細胞都凍上,過了年回來再開干。
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